Comet Assay (Tək Hüceyrəli Gel Elektroforezi, SCGE) əsasən fərdi hüceyrələrdə DNT zədələnməsini və təmirini aşkar etmək üçün istifadə olunan həssas və sürətli üsuldur. "Comet Assay" adı nəticələrdə görünən xarakterik kometa bənzər formadan gəlir: hüceyrənin nüvəsi "başı" əmələ gətirir, zədələnmiş DNT fraqmentləri isə miqrasiya edərək kometə bənzəyən "quyruq" yaradır.
Prinsip
Comet Assay prinsipi DNT fraqmentlərinin elektrik sahəsində miqrasiyasına əsaslanır. Zədələnmiş və ya parçalanmış DNT kometin "quyruğunu" meydana gətirərək anoda doğru miqrasiya edərkən, bütöv DNT hüceyrə nüvəsində qalır. Quyruğun uzunluğu və intensivliyi DNT zədəsinin dərəcəsi ilə düz mütənasibdir.
Prosedur
- Hüceyrə Hazırlanması: Test ediləcək hüceyrələr aşağı ərimə nöqtəli agaroza ilə qarışdırılır və vahid təbəqə yaratmaq üçün mikroskop slaydlarına yayılır.
- Hüceyrə lizisi: Slaydlar DNT-ni ifşa edərək hüceyrə membranını və nüvə membranını çıxarmaq üçün lizis məhluluna batırılır.
- Elektroforez: Slaydlar qələvi və ya neytral şəraitdə elektroforez kamerasına yerləşdirilir. Zədələnmiş DNT fraqmentləri elektrik sahəsinin təsiri altında müsbət elektroda doğru miqrasiya edir.
- Boyanma: Elektroforezdən sonra slaydlar DNT-ni vizuallaşdırmaq üçün flüoresan boya ilə (məsələn, etidium bromid) boyanır.
- Mikroskopik analiz: Flüoresan mikroskopdan və ya xüsusi proqram təminatından istifadə edərək kometa formaları təhlil edilir və quyruq uzunluğu və intensivlik kimi parametrlər ölçülür.
Biorenderdən şəkil
Məlumatların təhlili
Kometa analizinin nəticələri bir neçə əsas parametr əsasında qiymətləndirilir:
- Quyruq Uzunluğu: DNT-nin miqrasiya etdiyi məsafəni təmsil edir, DNT zədəsinin dərəcəsini göstərir.
- Quyruq DNT tərkibi: Tez-tez DNT zədələnməsinin kəmiyyət ölçüsü kimi istifadə edilən quyruğa keçən DNT faizi.
- Zeytun quyruğu anı (OTM): DNT zədəsinin daha əhatəli ölçüsünü təmin etmək üçün həm quyruq uzunluğunu, həm də quyruq DNT tərkibini birləşdirir.
Tətbiqlər
- Genotoksisite Tədqiqatları: Kometa Təhlili kimyəvi maddələrin, dərmanların və radiasiyanın hüceyrə DNT-sinə təsirini qiymətləndirmək üçün geniş şəkildə istifadə olunur və bu, onu genotoksiklik testi üçün əsas vasitə halına gətirir.
- Ətraf mühitin toksikologiyası: Ətraf mühitin çirkləndiricilərinin orqanizmlərin DNT-sinə təsirini təhlil etməyə kömək edir, ekosistemin təhlükəsizliyinə dair fikirlər verir.
- Tibbi və Klinik Tədqiqat: Comet Assay DNT təmir mexanizmlərini, xərçəngi və digər DNT ilə əlaqəli xəstəliklərin öyrənilməsində istifadə olunur. O, həmçinin radioterapiya və kemoterapiya kimi xərçəng müalicələrinin DNT-yə təsirini qiymətləndirir.
- Qida və Kənd Təsərrüfatı Elmləri: Pestisidlərin, qida əlavələrinin və digər maddələrin təhlükəsizliyini qiymətləndirmək və heyvan modellərində onların zəhərli təsirlərini öyrənmək üçün istifadə olunur.
Üstünlüklər
- Yüksək Həssaslıq: DNT zədələnməsinin aşağı səviyyələrini aşkar edə bilir.
- Sadə Əməliyyat: Texnika sadədir və onu yüksək məhsuldarlıqlı skrininq üçün uyğun edir.
- Geniş tətbiq: Heyvan və bitki hüceyrələri də daxil olmaqla müxtəlif hüceyrə növlərinə tətbiq oluna bilər.
- Kəmiyyətləşdirmə Çətinlikləri: DNT zədələnməsi ilə bağlı keyfiyyətli məlumat təqdim edərkən, kəmiyyət analizi proqram təminatı və görüntü analizi üsullarından çox asılıdır.
- Eksperimental şərtlər: Nəticələrə elektroforez vaxtı və pH kimi amillər təsir edə bilər, bu da eksperimental şəraitə diqqətli nəzarət tələb edir.
Məhdudiyyətlər
Comet Assay DNT-nin zədələnməsinin və təmirinin aşkar edilməsində elastikliyinə və yüksək həssaslığına görə biotibbi tədqiqatlar, ətraf mühit elmləri və dərmanların hazırlanmasında əvəzsiz vasitədir. Beijing Liuyi Biotechnology Co. Ltd (Liuyi Biotechnology)kometa analizi üçün üfüqi elektroforez kamerası təklif edir. haqqında müzakirə etmək üçün bizimlə əlaqə saxlamağa xoş gəlmisinizKometa Təhliliprotokol.
Beijing Liuyi Biotechnology Co. Ltd (Liuyi Biotechnology) öz peşəkar texniki komandamız və R&D mərkəzimizlə 50 ildən artıq elektroforez alətləri istehsalında ixtisaslaşmışdır. Dizayndan tutmuş yoxlamaya, anbara, eləcə də marketinq dəstəyinə qədər etibarlı və tam istehsal xəttimiz var. Əsas məhsullarımız Elektroforez Hüceyrəsi (çən/kamera), Elektroforez Enerji Təchizatı, Mavi LED Transilluminator, UV Transilluminator, Gel Şəkil və Analiz Sistemi və s. Biz həmçinin laboratoriya üçün PCR aləti, burulğan qarışdırıcı və sentrifuqa kimi laboratoriya alətlərini təmin edirik.
Məhsullarımız üçün hər hansı bir satınalma planınız varsa, bizimlə əlaqə saxlamaqdan çəkinməyin. Bizə e-poçt ünvanına mesaj göndərə bilərsiniz[email protected]və ya[email protected], və ya +86 15810650221 nömrəsinə zəng edin və ya Whatsapp +86 15810650221 və ya Wechat: 15810650221 əlavə edin.
Whatsapp və ya WeChat-a əlavə etmək üçün QR kodunu skan edin.
Göndərmə vaxtı: 20 sentyabr 2024-cü il