Poliakrilamid gel elektroforezi nədir?

Poliakrilamid Gel Elektroforez

Gel elektroforezi bioloji fənlər üzrə laboratoriyalarda DNT, RNT və zülallar kimi makromolekulların ayrılmasına imkan verən əsas texnikadır. Müxtəlif ayırma mühitləri və mexanizmləri bu molekulların alt çoxluqlarını fiziki xüsusiyyətlərindən istifadə etməklə daha effektiv şəkildə ayırmağa imkan verir. Xüsusilə zülallar üçün poliakrilamid gel elektroforezi (PAGE) tez-tez seçim üsuludur.

SƏHİFƏ zülallar kimi makromolekulları elektroforetik hərəkətliliyinə, yəni analitlərin əks yüklü elektroda doğru hərəkət etmə qabiliyyətinə görə ayıran bir texnikadır. PAGE-də bu, molekulun yükü, ölçüsü (molekulyar çəkisi) və forması ilə müəyyən edilir. Analitlər poliakrilamid geldə əmələ gələn məsamələrdən keçir. DNT və RNT-dən fərqli olaraq, zülallar daxil olan amin turşularına görə məsul olaraq dəyişir və bu, onların işləməsinə təsir edə bilər. Amin turşusu zəncirləri, həmçinin onların görünən ölçüsünə və nəticədə məsamələrdən necə hərəkət edə bildiyinə təsir edən ikinci dərəcəli strukturlar yarada bilər. Buna görə də, ölçüsünün daha dəqiq qiymətləndirilməsi tələb olunarsa, bəzən zülalları xəttiləşdirmək üçün elektroforezdən əvvəl denatürasiya etmək məqsədəuyğun ola bilər.

SDS SƏHİFƏSİ

Natrium-dodesil sulfat poliakrilamid gel elektroforezi 5 ilə 250 kDa kütləsi olan zülal molekullarını ayırmaq üçün istifadə edilən bir üsuldur. Zülallar yalnız molekulyar çəkilərinə görə ayrılır. Natrium dodesil sulfat, anion səthi aktiv maddə, zülal nümunələrinin daxili yüklərini maskalayan və onlara oxşar yükün kütlə nisbətini verən gellərin hazırlanmasına əlavə edilir. Sadə sözlə, zülalları denatürasiya edir və onlara mənfi yük verir.

Doğma SƏHİFƏ

Native PAGE, zülalların ayrılması üçün denaturlaşdırılmamış gellərdən istifadə edən bir texnikadır. SDS PAGE-dən fərqli olaraq, gellərin hazırlanmasında heç bir denaturasiya agenti əlavə edilmir. Nəticədə zülalların ayrılması zülalların yükü və ölçüsü əsasında baş verir. Bu texnikada zülalların konformasiyası, qatlanması və amin turşusu zəncirləri ayrılmanın asılı olduğu faktorlardır. Bu prosesdə zülallar zədələnmir və ayrılma tamamlandıqdan sonra bərpa oluna bilər.

Poliakrilamid gel elektroforezi (PAGE) necə işləyir?

PAGE-in əsas prinsipi analitləri elektrik cərəyanından istifadə edərək poliakrilamid gelin məsamələrindən keçirərək ayırmaqdır. Buna nail olmaq üçün akrilamid-bisakrilamid qarışığı ammonium persulfat (APS) əlavə edilməklə polimerləşir (poliakrilamid). Tetrametiletilendiamin (TEMED) tərəfindən katalizləşdirilən reaksiya, analitlərin hərəkət edə biləcəyi məsamələri olan şəbəkəyə bənzər bir quruluş meydana gətirir (Şəkil 2). Gelin tərkibinə daxil olan ümumi akrilamidin faizi nə qədər yüksək olarsa, məsamələrin ölçüsü bir o qədər kiçik olar, buna görə də keçə biləcək zülallar bir o qədər kiçik olar. Akrilamidin bisakrilamid nisbəti də məsamələrin ölçüsünə təsir edəcək, lakin bu çox vaxt sabit saxlanılır. Daha kiçik məsamə ölçüləri həmçinin kiçik zülalların geldən keçmə sürətini azaldır, onların həllini yaxşılaşdırır və cərəyan tətbiq edildikdə onların sürətlə tampona keçməsinin qarşısını alır.

Poliakrilamid Gel Elektroforez üçün avadanlıq

Gel Elektroforez Hüceyrəsi (Tank/Kamera)
Poliakrilamid gel elektroforezi (PAGE) üçün gel tankı agaroz gel tankından fərqlidir. Agaroz gel çəni üfüqi, PAGE çəni isə şaquli vəziyyətdədir. Şaquli elektroforez hüceyrəsi (çən/kamera) ilə iki şüşə boşqab arasına nazik gel (adətən 1,0 mm və ya 1,5 mm) tökülür və jelin dibi bir kamerada tampona, üstü isə tampona batırılır ki, quraşdırılır. başqa kamerada. Cari tətbiq edildikdə, az miqdarda tampon gel vasitəsilə yuxarı kameradan aşağı kameraya keçir. Quraşdırmanın şaquli vəziyyətdə qalmasını təmin etmək üçün güclü sıxaclar ilə avadanlıq hətta soyutma ilə sürətli gel qaçışını asanlaşdırır və nəticədə fərqli lentlər yaranır.

Beijing Liuyi Biotechnology Co., Ltd. (Liuyi Biotechnology) bir sıra ölçülərdə poliakrilamid gel elektroforez hüceyrələri (çənlər/kameralar) istehsal edir. DYCZ-20C və DYCZ-20G modelləri DNT ardıcıllığının təhlili üçün şaquli elektroforez hüceyrələridir (çənlər/kameralar). DYCZ-24DN, DYCZ-25D və DYCZ-25E modeli kimi şaquli elektroforez hüceyrələrinin bəziləri (çənlər/kameralar) blotlama sistemi ilə uyğundur, DYCZ-40D, DYCZ-40G və DYCZ-40F modeli Western Blotting sistemi ilə uyğun gəlir. protein molekulunu geldən membrana köçürmək üçün istifadə olunur. SDS-PAGE elektroforezindən sonra Western Blotting zülal qarışığında xüsusi zülalın aşkarlanması üsuludur. Siz eksperimental tələblərə uyğun olaraq bu blot sistemlərini seçə bilərsiniz.

Elektroforez enerji təchizatı
Gelin işləməsi üçün elektrik enerjisini təmin etmək üçün elektroforez enerji təchizatı lazımdır. Liuyi Biotechnology-də biz bütün tətbiqlər üçün bir sıra elektroforez enerji təchizatı təmin edirik. Yüksək sabit gərginliyə və cərəyana malik DYY-12 və DYY-12C modeli yüksək gərginlikli elektroforez tələblərinə cavab verə bilər. Stand, vaxt, VH və addım-addım tətbiq funksiyasına malikdir. Onlar IEF və DNT sıralama elektroforez tətbiqi üçün idealdır. Ümumi zülal və DNT elektroforez tətbiqi üçün DYY-2C, DYY-6C, DYY-10 və s. modelimiz var ki, bunlar da elektroforez hüceyrələri (tanklar/kameralar) ilə isti satış enerji təchizatıdır. Bunlar orta və aşağı gərginlikli elektroforez tətbiqləri üçün, məsələn, məktəb laboratoriyası, xəstəxana laboratoriyası və s. üçün istifadə edilə bilər. Enerji təchizatı üçün daha çox modellər, lütfən veb saytımıza daxil olun.

Liuyi brendinin Çində 50 ildən çox tarixi var və şirkət bütün dünyada sabit və yüksək keyfiyyətli məhsullar təqdim edə bilir. İllərin inkişafı sayəsində seçiminizə layiqdir!

Haqqımızda ətraflı məlumat üçün e-poçt vasitəsilə bizimlə əlaqə saxlayın[email protected] or [email protected].

İstinadlar Poliakrilamid gel elektroforezi nədir?
1. Karen Steward PhD Poliakrilamid gel elektroforezi, necə işləyir, texnika variantları və tətbiqləri