Prinsip
Selüloz asetat filminin elektroforezi, dayaq kimi selüloz asetat filmindən istifadə edilən elektroforez üsuludur.Elektrik sahəsinin təsiri altında yüklü hissəciklərin əks elektroda doğru hərəkət etməsi hadisəsinə elektroforez deyilir.Hər bir zülalın özünəməxsus izoelektrik nöqtəsi olduğundan, pH-ı izoelektrik nöqtəsindən aşağı olan məhlulda zülal yerləşdirilərsə, zülal müsbət yüklənəcək və mənfi elektroda doğru hərəkət edəcəkdir.Əksinə, müsbət qütbə doğru hərəkət edir.Elektrik sahəsində hərəkət edən zülal molekullarının sürəti onların yükü, molekulların forması və ölçüsü ilə əlaqəli olduğundan, müxtəlif zülalları elektroforezlə ayırmaq olar.Serumda pH7.5 və ya daha az olan izoelektrik nöqtələrə malik olan müxtəlif zülallar var.Serum elektroforezi aparmaq üçün pH 8.6 tamponuna yerləşdirildikdə, bütün serum zülalları mənfi yüklənir və elektrik sahəsində müsbət tərəfə doğru hərəkət edir.Müxtəlif zərdab zülalları eyni pH-da müxtəlif yüklərə malik olduğundan, molekulyar hissəciklərin ölçüləri fərqlidir və beləliklə, miqrasiya sürəti fərqli olur və onlar elektroforezlə ayrılır.Serum zülallarının izoelektrik nöqtələri və molekulyar çəkiləri aşağıdakı cədvəldə göstərilmişdir:
| Zülal | İzoelektrik nöqtələr (PI) | Molekulyar çəki |
| Albumin | 4.88 | 69 000 |
| α1-qloulin | 5.00 | 200 000 |
| α2-qloulin | 5.06 | 300 000 |
| β-gloulin | 5.12 | 9 000 ~ 150 000 |
| γ-qloulin | 6.85~7.50 | 156 000~ 300 000 |
Təcrübə qan zərdabında müxtəlif zülalları selüloz asetat membranı (abbr. CAM) ilə dəstəkləyici mühit kimi ayırmaqdan ibarətdir.CAM bir növ köpüklənmiş loosdureyaxşı uniforma ilə film və qalınlığı müəyyən su udma olan 0.1mm-1.5mm edir.
CAM Elektroforezi üçün materiallar, alətlər və reagentlər
Nümunələr:sağlam insan qan serumu
Alət:enerji təchizatı DYY-6C, elektroforez çəni DYCP-38C, üstün nümunə yükləmə WD-9404
Reagentlər
1) sellüloza asetat membranı 7X9sm
2) PH 8,6 barbitol bufer məhlulu (ion gücü 0,05-0,09, 0,06 tid vaxtdır): 1,84 q Dietil barbiturik turşusu götürün, sonra 1,03 q Dietil natrium pentobarbital götürün, həll etmək üçün qızdırmaq üçün bir az distillə edilmiş su əlavə edin və hazırlayın. 1000 ml-ə qədər;
3) Ləkə: Ponceau S 0.2g, Trichloroacetic 3g, 100ml distillə edilmiş su əlavə edin;
4) TBS/T və ya PBS/T: 45ml 95% etanol, 5ml buzlu sirkə turşusu, 50ml distillə edilmiş su əlavə edin;
5) Təmizləyici məhlul: 70ml susuz etanol, 30ml buzlu sirkə turşusu.
Təcrübə üsulud
1) Membran hazırlayın: Membrananı barbitol bufer məhluluna 30 dəqiqə-8 saat batırın və onu çıxarın, əlavə məhlulu uducu kağızla çıxarın.
2) Nümunələrin yüklənməsi: Membranın kobud tərəfini və hamar tərəfini fərqləndirin və kobud tərəfdən yuxarı ucuna qədər 1,5 sm məsafədə bir xətt qeyd edin.Nümunələri kobud tərəfdən üstün nümunə yükləmə aləti ilə yükləyin.Qeyd: Nümunələr membranın kobud tərəfinə yüklənməlidir.Serum nümunələri membrana tam nüfuz etdikdən sonra, membranı çevirin, qaba tərəfi (nümunələr ilə) üzü aşağı çənə qoyun və nümunələr olan ucu mənfi elektroda yerləşdirilir.
3) Elektroforez: Enerji təchizatını yandırın, 0,4～0,6m A/sm membran, işləmə müddəti 30-45 dəq.Elektroforezi işə saldıqdan sonra enerjini söndürün.
4) Ləkələyin və təmizləyin: Membranı tankdan çıxarın və suya batırınit 5 dəqiqə ərzində boya məhluluna daxil edin və sonra fon rəngi aydın olana qədər təmizləyici məhlulda 3-4 dəfə təkrar təmizləyin.Serum zülalları lentlərdə göstərilməlidir və normal olaraq beş zona var, qeyd olunan xəttin yuxarı ucunu təşkil edir, Albumin, α1-gloulin, α2-gloulin, β-gloulin, γ-gloulin.
5) Qoruma: quru elektroforez qoyunqruptəmizləyici məhlulda 10-15 dəqiqə saxlayın, sonra çıxarıb təmiz stəkanın üstünə yapışdırın, quruduqdan sonra şəffaf plyonkaya çevriləcək.qrup.
TəcrübəNəticə
Serum nümunələrinin ayırma effekti yaxşıdır və heç bir band tailing fenomeni yoxdur.Nəticələrin təkrarlanma qabiliyyəti sınaq prosedurlarına və eksperimentatorun metodlarına görə dəyişir və təkrarlanma qabiliyyəti yüksəkdir.
Nəticə
Sürətli klinik elektroforez aşkarlama sistemi (Elektroforez tankıDYCP-38C,enerji təchizatıDYY-6C və üstün nümunə yükləmə WD-9404) bizim tərəfindən istehsal olunurşirkət Beijing Liuyi Biotechnology Co., Ltdeksperimental tələblərə cavab verir,vənəticələr təkrarlana bilən, sadə və sürətli, uyğundurtədristədqiqat.
Pekin LiuyiBiotechnology Co., Ltd həyat elmi sənayesi üçün elektroforez məhsulları istehsalında ixtisaslaşmışdır.Çində 50 ildən çox tarixə malikdir və şirkət bütün dünyada sabit və yüksək keyfiyyətli məhsullar təqdim edə bilər.İllər boyu inkişaf yolu ilə seçiminizə layiqdir!
İndi tərəfdaşlar axtarırıq, həm OEM elektroforez tankı, həm də distribyutorlar qarşılanır.
Haqqımızda əlavə məlumat üçün e-poçt vasitəsilə bizimlə əlaqə saxlayın[email protected]və ya[email protected].
Göndərmə vaxtı: 14 noyabr 2022-ci il