Keçən həftə selüloz asetat membran elektroforezindən istifadə etmək üçün bir neçə mülahizəni paylaşdıq və bu mövzunu sizin üçün bu gün burada bitirəcəyik.
seçimi Tampon konsentrasiyası
Selüloz asetat membran elektroforezində istifadə olunan tampon konsentrasiyası ümumiyyətlə kağız elektroforezində istifadə olunandan daha aşağıdır. Ümumi istifadə olunan pH 8.6Barbital tampon adətən 0,05 mol/L ilə 0,09 mol/L aralığında seçilir. Konsentrasiyanı seçərkən ilkin müəyyən edilir. Məsələn, elektroforez kamerasında elektrodlar arasında membran zolağının uzunluğu 8-10 sm olarsa, membran uzunluğunun hər santimetrinə 25V gərginlik tələb olunur və cərəyan intensivliyi membranın eninin santimetrinə 0,4-0,5 mA olmalıdır. Elektroforez zamanı bu dəyərlərə nail olunmazsa və ya aşılmazsa, bufer konsentrasiyası artırılmalı və ya seyreltilməlidir.
Həddindən artıq aşağı bufer konsentrasiyası zolaqların sürətli hərəkətinə və bant genişliyinin artmasına səbəb olacaqdır. Digər tərəfdən, həddindən artıq yüksək bufer konsentrasiyası zolağın miqrasiyasını ləngidir, müəyyən ayırma zolaqlarını ayırd etməyi çətinləşdirir.
Qeyd etmək lazımdır ki, sellüloza asetat membran elektroforezində cərəyanın əhəmiyyətli bir hissəsi nümunə vasitəsilə aparılır ki, bu da xeyli miqdarda istilik əmələ gətirir. Bəzən seçilmiş tampon konsentrasiyası uyğun hesab edilə bilər. Bununla belə, artan ətraf mühitin temperaturu şəraitində və ya daha yüksək gərginlikdən istifadə edərkən, suyun istilik səbəbindən buxarlanması intensivləşə bilər, nəticədə həddindən artıq yüksək tampon konsentrasiyası və hətta membranın qurumasına səbəb ola bilər.
Nümunə Həcmi
Sellüloza asetat membran elektroforezində nümunənin həcminin miqdarı müxtəlif amillərlə, o cümlədən elektroforez şəraiti, nümunənin özünün xüsusiyyətləri, boyanma üsulları və aşkarlama üsulları ilə müəyyən edilir. Ümumi prinsip olaraq, aşkarlama üsulu nə qədər həssasdırsa, nümunənin həcmi bir o qədər kiçik ola bilər ki, bu da ayırma üçün əlverişlidir. Nümunə həcmi həddindən artıq olarsa, elektroforetik ayırma nümunələri aydın olmaya bilər və boyanma da vaxt apara bilər. Bununla belə, elüsyon kolorimetrik aşkarlama üsullarından istifadə etməklə ayrılmış ləkələnmiş zolaqları kəmiyyətcə təhlil edərkən nümunənin həcmi çox kiçik olmamalıdır, çünki bu, müəyyən komponentlər üçün aşağı udulma qiymətləri ilə nəticələnə bilər ki, bu da onların məzmununun hesablanmasında daha yüksək xətalara səbəb ola bilər. Belə hallarda nümunənin həcmi müvafiq olaraq artırılmalıdır.
Tipik olaraq, nümunənin tətbiqi xəttinin hər santimetrinə əlavə edilən nümunə həcmi 0,1 ilə 5 μL arasında dəyişir, 5 ilə 1000 mkq arasında olan nümunə miqdarına bərabərdir. Məsələn, adi zərdab zülalının elektroforez analizində tətbiq xəttinin hər santimetrinə əlavə edilən nümunənin həcmi ümumiyyətlə 1 μL-dən çox deyil, 60-80 μg proteinə bərabərdir. Bununla belə, eyni elektroforez metodundan istifadə edərək lipoproteinləri və ya qlikoproteinləri təhlil edərkən nümunənin həcmini müvafiq olaraq artırmaq lazımdır.
Yekun olaraq, bir sıra ilkin təcrübələr vasitəsilə xüsusi şərtlər əsasında ən uyğun nümunə həcmi seçilməlidir.
Boyama məhlulunun seçilməsi
Selüloz asetat membran elektroforezində ayrılmış zolaqlar adətən aşkarlanmadan əvvəl boyanır. Müxtəlif nümunə komponentləri fərqli rəngləmə üsullarını tələb edir və selüloz asetat membranının elektroforezi üçün uyğun olan boyanma üsulları filtr kağızı üçün tamamilə tətbiq olunmaya bilər.
Boyama həllini seçmək üçün üç əsas prinsip varsellüloza asetat membranı. İlk olaraq,Membran büzülməsinin və sonuncunun boyanma məhlulunun yaratdığı deformasiyanın qarşısını almaq üçün spirtdə həll olunan boyalara nisbətən suda həll olunan boyalara üstünlük verilməlidir. Ləkədən sonra membranı su ilə yaxalamaq və boyanma müddətini minimuma endirmək vacibdir. Əks halda, membran qıvrıla və ya büzülə bilər ki, bu da sonrakı aşkarlanmaya təsir göstərə bilər.
İkincisi, nümunə üçün güclü boyanma yaxınlığına malik boyaları seçmək üstünlük təşkil edir. Serum zülallarının sellüloza asetat membran elektroforezində zərdabın müxtəlif zülal komponentlərinə güclü boyanma yaxınlığına və sabitliyinə görə amin qara 10B adətən istifadə olunur.
Üçüncüsü, etibarlı keyfiyyətli boyalar seçilməlidir. Bəzi boyalar, eyni ada malik olmasına baxmayaraq, boyandıqdan sonra xüsusilə qaranlıq bir fonla nəticələnən çirkləri ehtiva edə bilər. Bu, hətta ilkin olaraq yaxşı ayrılmış zolaqları bulandıra bilər ki, bu da onları ayırd etməyi çətinləşdirir.
Nəhayət, boyama məhlulunun konsentrasiyasının seçimi vacibdir. Teorik olaraq, belə görünə bilər ki, daha yüksək boyama məhlulu konsentrasiyası nümunə komponentlərinin daha hərtərəfli boyanmasına və daha yaxşı boyanma nəticələrinə gətirib çıxaracaq. Lakin bu, belə deyil. Nümunə komponentləri ilə boya arasında bağlanma yaxınlığı müəyyən bir həddə malikdir, bu da boyanma məhlulunun konsentrasiyasının artması ilə artmır. Əksinə, həddindən artıq yüksək boyanma məhlulunun konsentrasiyası yalnız boyanı israf etmir, həm də aydın fon əldə etməyi çətinləşdirir. Üstəlik, rəng intensivliyi müəyyən maksimum dəyərə çatdıqda, boyanın absorbsiya əyrisi, xüsusən kəmiyyət ölçmələrində xətti əlaqəyə əməl etmir. Selüloz asetat membran elektroforezində boyama məhlulunun konsentrasiyası ümumiyyətlə kağız elektroforezində istifadə ediləndən daha aşağı olur.
Pekin Liuyi Biotexnologiyası haqqında bilmək üçün təfərrüatlar's sellüloza asetat membranıelektroforez tankı və onun elektroforez tətbiqi, lütfən, bura daxil olun:
lSellüloza Asetat Membran ilə serum zülalının ayrılması üçün təcrübə
lSellüloza Asetat Membran Elektroforezi
lSellüloza Asetat Membran Elektroforezindən İstifadə Edərkən Bir neçə Mülahizə Nəzərə alınmalıdır (1)
Məhsullarımız üçün hər hansı bir satınalma planınız varsa, bizimlə əlaqə saxlamaqdan çəkinməyin. Bizə e-poçt ünvanına mesaj göndərə bilərsiniz[email protected]və ya[email protected], və ya +86 15810650221 nömrəsinə zəng edin və ya Whatsapp +86 15810650221 və ya Wechat: 15810650221 əlavə edin.
İstinad:Cənab Li tərəfindən Elektroforez (İkinci nəşr).
Göndərmə vaxtı: 06 iyun 2023-cü il